）具有高发病率和高死亡率的特点☆□，是严重威胁人类健康和耗费健康保障投入的大有效策略，但近期研究显示即使在成功再灌注后使用抗心脏重塑药物，指数住院出院后发生是心肌细胞死亡、神经激素激活、心肌纤维化等多种复杂病理过程相互作用引发心脏重塑失代偿的结果。虽然抗心脏重塑药物取得了可喜进展，但即使使用最佳抗重塑药物方案-，仍有很大比例心肌梗死患者会出现心脏重塑▼●☆，但它们的主要作用机制是抑制神经激素系统，探索干预神经激素系统以外其他心脏重塑机制的药物是

　　三七在我国作为保健膳食及防治药物具有悠久历史■●，以三七及其提取物为组分的成药制剂广泛用于心血管疾病临床防治★▲。三七皂苷R1（notoginsenoside R1，NGR1）是从三七Panax notoginseng(Burk○●▲.) F▲-•. H. Chen主要提取物三七总皂苷中分离出的重要活性化合物…△。近年来，一些基础研究揭示了NGR1在抗MIRI中的潜在作用◁，认为NGR1可减小MIRI诱导的模型动物梗死面积，改善心肌病理损伤、心肌纤维化及心功能☆●▷，其作用机制主要与抑制细胞凋亡[11-13]□、线粒体损伤[14-16]、炎症反应[17]和氧化应激[18]等有关。本课题组前期研究表明NGR1可通过PINK1/Parkin途径抑制线粒体自噬改善人心肌细胞缺氧/复氧损伤[19]。此外，一些研究也显示NGR1具有抗心脏重塑潜力[20]。一项研究显示NGR1可调控巨噬细胞极化以抑制小鼠AMI后心脏神经重塑[21]，另一项研究表明NGR1可阻止β2AR泛素化和降解改善AMI后HF模型小鼠的心功能和心室重塑[22]☆○。

　　综上，探索同具抗MIRI及心脏重塑的药物预防AMI指数住院后HF具有重要意义。既往研究表明NGR1具有多机制抗MIRI及心室重塑潜力。但尚缺乏研究探讨NGR1对MIRI后心脏重塑的作用及机制。故本研究通过结扎小鼠冠状动脉构建MIRI后心肌重塑动物模型，以观察NGR1对小鼠MIRI诱导的心脏重塑的作用并初步探讨其机制，以期为NGR1在AMI后HF防治中的潜在临床价值研究提供依据。

　　ZH-RG-4型小动物呼吸机（原阳县振华教学仪器有限公司）；BL-420F型小动物心电图机（成都泰盟软件有限公司）；DiM-8型荧光显微镜（德国Leica公司）；RS46Pro型小动物气体麻醉机（深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司）；VINNO6型小动物超声仪（苏州飞依诺科技股份有限公司）；FS-1200N型超声波破碎仪（上海生析超声仪器有限公司）；Varioskan LUX3020型多功能全波长酶标仪（美国Thermo公司）；PowerPac Basic型电泳仪、Universal hood型Chemi-DocTMXR＋曝光仪（美国Bio-Rad公司）；HT7800型透射电子显微镜（日本HITACHI公司）。

　　60只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组和NGR1低◆、高剂量（12◆-▲.5▽、25.0 mg/kg）[12,22]组，每组15只★。小鼠适应性喂养1周后，参照孙秀玉等[23]方法造模。模型组和NGR1低、高剂量组小鼠麻醉后，心前区脱毛■☆，气管插管后连接呼吸机□-◇，沿左第3～4肋间开胸▷◆，连接心电图机并记录肢导心电图。用7-0线带线缝合针于左心耳下1～2 mm处结扎左冠状动脉前降支△，心电图ST段上抬及结扎处下方心肌变白为缺血成功。缺血30 min后松开结扎，心电图ST段回落及结扎部位下方心肌恢复红色为再灌注成功。假手术组小鼠只穿线不结扎冠脉。术后第2天开始◁，给药组小鼠ip NGR1溶液（10 mL/kg），假手术组和模型组小鼠ip等体积的生理盐水•，1次/d，连续注射3周。

　　末次给药后☆，称定小鼠体质量并记录。在气体麻醉下开胸取心脏，预冷PBS冲洗后，用吸水纸充分吸干水分◁•，称定心脏质量并记录◆•-。剥出小鼠右胫骨后测量其长度★。计算心脏指数和心胫比。

　　小鼠心脏经4%多聚甲醛固定12 h，梯度乙醇脱水及浸蜡，石蜡包埋，用石蜡切片机将心肌切为5μm厚的薄片，水中用载玻片捞片•▷◁。梯度二甲苯脱蜡及梯度乙醇复水后，0.1% Triton-100孵育10 min以增加膜通透性★，滴加荧光标记的WGA染液于37℃孵育20 min，PBS洗涤3次后滴加DAPI染液（1∶500稀释）孵育5～10 min染核，封片后于荧光显微镜下观察并拍照▷★▪。采用Image J 1★△●.8○■.0软件测量心肌细胞横截面积■□◆。

　　组织包埋切片同▪“2▷.3”项△○。按改良Masson三色染色试剂盒说明◁，先后用天青石蓝染液、Mayer苏木素染液、丽春红品红染液、苯胺蓝染液等浸染组织，封片后于荧光显微镜下观察并拍照。采用Image J 1◁.8….0软件测量心脏胶原体积分数（collagen volume fraction，CVF）▲。

　　称取适量新鲜心肌组织，按Fe2+含量检测试剂盒和LPO含量检测试剂盒说明书处理组织▼◁•，检测Fe2+及LPO含量。

　　称取适量新鲜心肌组织，加入细胞裂解液（RIPA裂解液∶蛋白酶抑制剂PMSF＝100∶1）并剪碎组织，超声波破碎仪破碎细胞，4℃、12 000 r/min离心10 min后取上清。据BCA蛋白定量试剂盒说明书测定蛋白浓度。蛋白样品经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，转至PVDF膜，于5%脱脂牛奶中封闭1 h▲□，分别加入ANP（1∶2 000）、BNP（1∶2 000）、collagen I（1∶1 000）、collagen III（1∶1 000）、TFR1（1∶1 000）、SLC7A11（1∶1 000）、GPX4（1∶2 000）、ACSL4（1∶5 000）抗体，4℃孵育过夜▽=◁；加入HRP标记的山羊抗鼠/兔IgG抗体（1∶10 000），室温孵育1.5 h◁…◇。加入ECL化学发光液，孵育后采用曝光仪显影，采用Image J 1.8☆★◆.0软件分析条带灰度值。

　　取小鼠心脏后，预冷PBS冲洗★，于结扎部位稍下方切取约1 mm3的心肌组织，电镜固定液固定组织◁，脱水，包埋◇□，切70 nm的组织薄片▲●，染色，采用生物透射电镜观察线粒体形态▽-。

　　所有数据均采用GraphPad Prism 10.0软件进行统计分析，数据以表示。多组间比较采用单因素方差分析。

　　3△….1.1NGR1对小鼠MIRI后心脏肥大及心肌细胞肥大的影响如图1所示◇☆◁，与假手术组比较，模型组小鼠心脏指数▪▲□、心胫比、LVEDV◇•○、LVESV和细胞横截面积均显著增加（P＜0.05、0.01）；与模型组比较，NGR1各剂量组小鼠心脏指数、心胫比、LVEDV、LVESV和细胞横截面积均显著降低（P＜0.05、0.01）★▷=。

　　3.1.2NGR1对小鼠MIRI后心肌纤维化的影响如图2所示，与假手术组比较，模型组小鼠CFV及心肌组织collagenⅠ◁、collagenⅢ蛋白表达水平显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，NGR1高剂量组小鼠CVF及心肌组织collagenⅠ、collagenⅢ蛋白表达水平均显著降低（P＜0=▪-.05、0.01）☆◆◇，NGR1低剂量组小鼠CVF及心肌组织collagenⅠ蛋白表达水平均显著降低（P＜0◇○.05、0.01）▽…•。

　　3□■■.1•●.3NGR1对MIRI小鼠心功能的影响如图3所示○-•，与假手术组比较◇，模型组小鼠LVEF和LVFS均显著降低（P＜0.01），心肌组织ANP和BNP蛋白表达水平显著升高（P＜0◇▲.01）；与模型组比较▽□，NGR1高剂量组LVEF和LVFS显著升高（P＜0.01）▼…，心肌组织ANP和BNP蛋白表达水平显著降低（P＜0▽-▼.01）；NGR1低剂量组LVEF和LVFS显著升高（P＜0.01），BNP蛋白表达水平显著降低（P＜0☆○.01）。

　　3▷•.2.1基于网络药理学探讨NGR1改善小鼠MIRI后心脏重塑的可能机制在公共数据库中检索NGR1的靶点▼◆▪，PharmMapper中检索到69个▲◇△，CTD中检索到91个○…，TCMSP中检索到1个▪，BATMAN中检索到1个，ChEMBL中检索到20个◆☆，ETCM中检索到18个=，汇总并去重后共计305个靶点▪…。公共数据库中检索MIRI靶点，GeneCard中检索到350个，OMIM中检索到56个，TTD中检索到1个，汇总并去重后得394个靶点。在Venny 2.1.0在线网站中获得NGR1与MIRI的交集靶点72个（图4-A）★■。对交集靶点进行GO分析（图4-B）▷，在GO分析的生物过程（biological process，BP）条目中显著性靠前的有正向调控程序性细胞死亡▲△◁，表明NGR1抑制MIRI后心脏重塑作用可能与细胞程序性死亡有关△▲◁。

　　3.2▼★.2NGR1对MIRI小鼠心肌组织铁离子蓄积的影响如图5-A、C、D所示，与假手术组比较，模型组小鼠心肌组织Fe2+含量和TFR1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05、0■.01）；与模型组比较▲-，NGR1高剂量组小鼠心肌组织Fe2+含量和TFR1蛋白表达水平显著降低（P＜0.01），NGR1低剂量组心肌组织Fe2+含量显著降低（P＜0.01）。

　　3.2□▷.3NGR1对MIRI小鼠心肌组织脂质过氧化水平的影响如图5-B～D所示■★◁，与假手术组比较，模型组小鼠心肌组织LPO含量和ACSL4蛋白表达水平显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，NGR1各剂量组小鼠心肌组织LPO含量和ACSL4蛋白表达水平均显著降低（P＜0▪▪.05、0.01）。

　　3.2.4NGR1对小鼠MIRI后心肌细胞线粒体损伤的影响如图5-E所示，与假手术组比较，模型组小鼠心肌线粒体结构遭到严重破坏，表现为线粒体数量减少，线粒体膜破裂，线粒体嵴数量减少▽•，残存的嵴断裂及密度增加●▪；与模型组比较，NGR1各剂量组线粒体损伤明显改善◇。

　　如图6所示，与假手术组比较，模型组小鼠心肌组织SLC7A11和GPX4蛋白表达水平显著降低（P＜0.01）；与模型组比较，NGR1高剂量组小鼠心肌组织SLC7A11和GPX4蛋白表达水平显著升高（P＜0.01）•…，NGR1低剂量组SLC7A11蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。